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全身性敲除
全身性敲除核心技术: • 全身性敲除
全身性敲除

基因敲除是研究基因功能的重要方法。传统ES打靶敲除方法,周期长,费用高。CRISPR/Cas9在基因敲除方面的优势:效率高,时间短,24天直接获得基因敲除小鼠。


技术一般的流程

设计合成gRNA→ 显微注射→ 小鼠出生检测。


技术优势或适合应用的研究

-效率高,可达90%的敲除效率,并且有一定纯合敲除比例。

-方便检测,从PCR条带的大小,容易区分是否发生敲除。

-时间短,24天获得基因敲除小鼠。

-不受敲除片段大小限制,从几十bp到Mb长度的DNA,都能有效敲除。


成功案例


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图1:两个Grna切割位点之间的~550bp基因序列被敲除,PCR检测,相对于野生带773bp,发生敲除的鼠产生~220bp的条带(箭头指向的条带)。